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流式细胞术

发布时间:2025-01-09 14:15:01

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流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。以下是关于它的详细介绍:


原理:待测样品(如细胞、染色体、精子或细菌等)经荧光染料染色或标记后制成样品悬液,在一定压力下通过壳液包围的进样管进入流动室,排成单列的细胞由流动室的喷嘴喷出成为细胞液流,并与入射激光束相交。细胞被激发产生荧光,由与入射激光束和细胞液流成 90° 处的光学系统收集。光学系统中的阻断滤片阻挡激发光,二色分光镜及其他阻断滤片选择荧光波长。荧光检测器通常为光电倍增管,散射光检测器是光电二极管,用于收集前向散射光,小角度前向散射与细胞大小有关。整个仪器用多道脉冲高度分析器处理荧光脉冲信号和光散射信号,测定结果用单参数直方图、双参数散点图、三维立体图和轮廓(等高)图来表示。

分选原理:由超声振荡器产生高频振荡,使流动室发生振动,把喷嘴喷出的细胞液流断裂成一连串均匀小液滴,有的液滴含有细胞。这些细胞在形成液滴前,光学系统已测定其信号。若测得信号与选定要分选的细胞性质符合,在选定细胞刚形成液滴时,仪器给整个液流充以短暂正或负电荷。当液滴离开液流后,被选定细胞的液滴带电,不被选定的不带电。带有正电或负电的液滴通过高压偏转板时发生向阴极或阳极的偏转,从而实现分类收集细胞。

仪器组成

液流系统:使细胞悬液形成稳定的单细胞液流,保证细胞逐个通过检测区域。

光路系统:包括激光器和一系列光学元件,不同波长的激光器发出的激光照射细胞后产生的光信号,经过不同光路系统被不同通道接收,采集的光信号有散射光信号(如 FSC 前向散射光反映细胞大小、SSC 侧向散射光反映细胞复杂程度)和荧光信号。

检测分析系统:以通道为单位将细胞各通道的光信号汇总分析,得出样品群体中细胞的物理化学特征,通道中的光电倍增管将光信号转变为电子信号并放大。

应用领域

细胞生物学:分析细胞的大小、形状、细胞周期、细胞表面标志、细胞内物质等,了解细胞的生物学特性和功能,如通过测定细胞周期各时相细胞的百分比,研究细胞的增殖状态。

免疫学:检测细胞表面标志物,用于了解免疫细胞的分化、功能和相互作用,如分辨 T 和 B 淋巴细胞及其亚群,判断免疫缺陷症、自身免疫病等。

肿瘤学:检测肿瘤细胞的表面标志物和基因表达,帮助了解肿瘤的发生、发展和治疗效果,还可在实验和临床中评价肿瘤化疗和放疗的作用。

血液学:检测血液中的细胞类型和数量,辅助诊断血液疾病,如白血病的分型诊断,以及监测治疗效果。

药物研发:对细胞进行高通量筛选,寻找新的药物靶点和评价药物的效果,例如通过检测药物作用后细胞的凋亡、周期变化等评估药物的疗效。