化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是一种将化学发光与免疫反应相结合的分析技术,以下是具体介绍:
原理
免疫反应特异性结合:利用抗原与抗体之间的高度特异性结合特性。在检测过程中,将已知的抗原或抗体固定在固相载体上,加入待检测样本,样本中如果存在相应的抗体或抗原,就会与固定在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合,形成免疫复合物。
化学发光反应:通过标记物(如化学发光剂)在特定化学反应中被激发,从基态跃迁到激发态,当回到基态时会释放出光子。例如,常用的吖啶酯类化学发光剂,在碱性条件下被过氧化氢等氧化剂氧化,生成处于激发态的 N - 甲基吖啶酮,当其回到基态时发出光子,产生化学发光信号。通过检测这种发光信号的强度,来确定样本中抗原或抗体的含量。
分类
直接化学发光免疫分析:将化学发光剂直接标记在抗原或抗体上,当标记的抗原或抗体与对应的抗体或抗原结合后,加入发光激发剂,直接产生化学发光信号,可快速得到检测结果。
间接化学发光免疫分析:先让抗原与未标记的一抗结合,再加入标记有化学发光剂的二抗,二抗与一抗特异性结合后,通过激发化学发光剂产生发光信号,提高了检测的灵敏度。
化学发光酶免疫分析:用酶(如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记抗原或抗体,在抗原 - 抗体结合后,加入酶的底物,酶催化底物反应产生化学发光,结合了酶免疫分析的高特异性和化学发光分析的高灵敏度。
特点
灵敏度高:能够检测到极低浓度的目标物质,可达到 pg/mL 甚至更低的检测限,有助于发现早期疾病或微量的生物标志物。
特异性强:基于抗原与抗体的特异性结合,减少了非特异性反应的干扰,提高了检测结果的准确性。
线性范围宽:在较宽的浓度范围内,检测信号与被测物质的浓度呈良好的线性关系,能够准确测量不同浓度水平的样本,减少了样本稀释等复杂的预处理步骤。
检测速度快:整个检测过程相对较短,尤其是一些快速检测方法,能够在短时间内提供检测结果,满足临床快速诊断的需求。
安全性好:与放射免疫分析等技术相比,不使用放射性物质,避免了放射性污染和对操作人员的辐射危害,更加安全可靠。
应用领域
临床诊断:在传染病检测中,可用于检测乙肝病毒表面抗原、丙肝抗体、艾滋病抗体等;在肿瘤标志物检测方面,能检测癌胚抗原、甲胎蛋白等;还可用于甲状腺功能检测、生殖激素检测等内分泌疾病诊断,以及自身免疫性疾病的相关抗体检测等。
食品安全检测:可检测食品中的农药残留、兽药残留、霉菌毒素等有害物质,以及食品中的病原体,如大肠杆菌、沙门氏菌等,保障食品安全。
环境监测:用于检测环境中的污染物,如重金属离子、有机污染物等,以及水体中的细菌、病毒等微生物,为环境保护和治理提供技术支持。